بررسي عفونت ريوي مايكوپلاسمايي ناشي از مايكوپلاسما مايكوئيدس واريته مايكوئيدس و مايكوپلاسما كاپري كولوم واريته كاپري كولوم در گوسالهها و بزهاي كشتارشده به روش PCR
مقدمه
عفونت پلوروپنوموني واگير، بيماري تحليل برنده تنفسي است كه با جاي گرفتن در طبقهبندي بيماريهاي سازمان جهاني كنترل بيماريهاي واگير، لزوم و اهميت شناسايي آن مشخص شده است. عامل اصلي اين بيماري، گونه مايكوپلاسما مايكوئيدس ميباشد كه تايپ كلوني كوچك آن بطور اختصاصي به گلههاي گاو، خسارات فراواني ناشي از همهگيري گسترده و مرگ و مير فراوان تحميل كرده است.
تايپ كلوني بزرگ اين گونه همراه با دو گونه ديگر بنامهاي مايكوپلاسما كاپري كولوم كاپري كولوم و مايكوپلاسما مايكوئيدس كاپريفرم غيركلاسيك پلوروپنوموني واگير را در گلههاي گوسفند و بز بوجود آوردهاند. اين بيماري در فرم كلاسيك، كه عامل آن مايكوپلاسما كاپري كولوم كاپري پنوموني شناخته ميشود، خسارات اقتصادي سهمگيني در گلههاي بز و گوسفند موجب گرديده است.
از آنجائيكه منطقه خاورميانه جزو مناطق مشكوك به آلودگي پلوروپنوموني واگير محسوب ميشود، حفظ وضعيت عاري بودن از عفونت در اين منطقه، مشكل يا تقريبا غيرممكن بوده و نيازمند بازنگري درراهبردهاي بكار رفته به منظور تشخيص و كنترل اين عفونتهاست. عدم برخورداري از خصوصيت پاتوگونوميك تشخيصي و پاتولوژيكي، مسير بيماريزايي ناشناخته و تنوع فنوتيپي بسيار پيچيده ارگانيسم در مواجهه با دستگاه ايمني ميزبان، بر مشكل شناسايي آن افزوده است. علاوه بر اين ، ابقا طولاني مدت باكتري در محل عفونت و وجود ناقلين بدون علامت، برنامه كنترل بيماري را با چالش روبرو كرده است.
از اين رو، شناسايي و بكارگيري روشهاي تشخيصي و تفريقي گونههاي كلاستر مايكوپلاسما مايكوئيدس كه هركدام استراتژي جداگانه اي در برخورد با عفونت گلهها دارند، از اهميت ويژهاي برخوردار است.
تعداد صفحات 176 word
فهرست
الف- مقدمه
ب-چكيده
1- تاريخچه
2- خصوصيات كلي مايكوپلاسما.............................................................. 6
3- مقاومت مايكوپلاسماها........................................................... 8
4- طبقه بندي مايكوپلاسماها................................................................... 9
5- طبقه بندي كلاستر مايكوئيدس................................................................. 12
6- فيلوژني ....................................................................... 14
7- ساختمان 15
1-7-ساختمان مايكوپلاسما مايكوئيدس ................................................. 15
2-7- ساختمان مايكوپلاسما كاپري كولوم ........................................................ 17
8- بيولوژي مولكولي.......................................................................... 19
9- تواليهاي تكراري............................................................. 23
10- پروتئينهاي سطحي....................................................................... 25
11- فاكتور حدت 30
12- آناليز پروتئين ............................................................................. 32
13- طبقه بندي سويهها .................................................................... 34
14- مشخصات گونه مايكوئيدس...................................................... 35
15- كشت و رشد گونه مايكوئيدس ................................................................................ 38
16- كشت و رشد گونه كاپري كولوم ........................................................................ 41
1-16- محيط Thiacourt ....................................................................... 41
17- بيماري پلوروپنوموني واگير گاوان................................................................. 44
1-17- علائم باليني ................................................................................. 45
2-17- علائم كالبدگشايي بيماري ........................................................................................................ 47
3-17- پاتوژنز 50
1-3-17- مكانيسمهاي مقابله با دستگاه ايمني............................................................................................ 53
4-17- اختصاصيت ميزبان..................................................................................... 57
5-17- انتقال بيماري ......................................................................................... 58
6-17- سير همه گيري ...................................................................... 59
1-6-17- مخزن 59...................................................................................
2-6-17- راه انتقال................................................................... 59
7-17- پيشگيري و كنترل..................................................................... 60
1-7-17- اقدامات لازم براي حفاظت مناطق عاري از بيماري........................................................................... 61
2-7-17- اقدامات لازم هنگام شيوع بيماري.............................................................................................. 62
3-7-17- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومي........................................................................................... 63
18- بيماري پلوروپنوموني واگير بزان .................................................................................................. 63
1-18- علائم باليني .............................................................................. 64
2-18- علائم كالبد گشايي................................................................ 66
19- گونه مايكوپلاسما كاپريكولوم كاپريكولوم........................................................ 69
1-19- سندروم MASKePs..................................................................... 70
2-19- علائم باليني.............................................................................. 71
3-19- علائم كالبد گشايي..................................................................... 71
4-19- سندروم آگالاكتيه واگير................................................................ 73
20- گونه مايكوپلاسما كاپري .................................................................. 73
1-20- بيماريزايي ............................................................................ 73
2-20- علائم كالبد گشايي...................................................................... 74
21- سير همهگيري.................................................................... 75
1-21-مخزن ....................................................................... 75
2-21-راه انتقال ...........................................................................
3-21-جمعيت ميزبان........................................................................ 77
22-پيشگيري وكنترل ..................................................................... 77
1-22- اقدامات لازم براي محافظت مناطق عاري از بيماري...................................... 77
2-22- اقدامات لازم هنگام شيوع بيماري....................................................................... 78
3-22- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومي................................................................... 78
23-واكسن ......................................................... 79
1-23-واكسن MmmLC ............................................................................................................ 79
2-23-واكسن Mccp ..................................................................... 79
25-تشخيص افتراقي................................................................ 80
1-25-شناسايي عامل بيماري زا ........................................................ ...... 81
1-1-25-بررسي ميكروسكوپيك اگزوداي ريه از طريق تهيه اسمير يا برش بافتي............................ 81
2-25- تشخيص آزمايشگاهي ............................................................... 81
1-2-25- روش كشت و جداسازي......................................................... 81
1-1-2-25- انتخاب نمونه ها .................................................................... 82
2-1-2-25- آماده سازي نمونه ها .............................................................. 82
3-25- تستهاي بيوشيمي............................................................ 83
4-25- روشهاي سرولوژي.................................................................. 85
1-4-25- عوامل موثر در آزمايشات سرولوژي ...................................................... 85
2-4-25- تست مهاري رشد ....................................................................... 87
3-4-25- تست ايمونو فلورسانس .................................................................... 88
4-4-25- تست رسوب ژلي................................................................ ...... 88
5-4-25- تست فيكساسيون كامپلمان ..................................................... 89
6-4-25- تست ممانعت از هماگلوتيناسيون ..................................................................... 89
7-4-25- تست آگلوتيناسيون لاتكس................................................................... 90
8-4-25- تست اليزاي رقابتي.................................................................... 91
9-4-25- ساير تستهاي تشخيصي................................................................... 94
5-25 - مشكلات روشهاي سنتي.......................................................................... 94
6-25- تشخيص با استفاده از PCR....................................................... 95
فصل دوم: روش كار
26- روش كار 101
1-26- جمع آوري نمونه ............................................................................ 101
1-1-26- مواد لازم.................................................................................. 101
2-1-26- بخش جمع آوري نمونه........................................................... 101
3-1-26- نمونه برداري ......................................................................... 103
2-26- كشت و جداسازي نمونه ها............................................................. 104
1-2-26- مواد لازم ....................................................................... 104
2-2-26- طرز تهيه محيط كشت اختصاصي براي جداسازي مايكوپلاسماي نشخوار كنندگان ................. 106
1-2-2-26- مواد لازم ........................................................................ 106
2-2-2-26- روش تهيه محيط كشت........................................................................... 107
3-26- استخراج DNA مايكوپلاسما........................................................... 109
1-3-26- روش استخراج DNA از نمونه هاي ارسالي................................................... 109
4-26- فرايند PCR ............................................................. 110
1-4-26- مواد لازم .............................................................. 110
2-4-26- آماده سازي مواد جهت واكنش PCR ........................................................ 112
1-2-4-26- افزوده سازي DNA نمونهها ..................................................... 112
2-2-4-26- افزوده سازي DNA كلونيهاي جدا شده................................................. 115
3-2-4-26- تهيه مخلوط اصلي اوليه.................................................................... 115
3-4-26- پرايمرها.................................................................... 115
4-26- واكنش PCR................................................................ 117
5-26- تهيه ژل الكتروفورز .................................................................. 118
1-5-26- طرز تهيه محلول اتيديوم برمايد .................................................... 119
6-26- الكتروفورز .................................................................. 121
7-26- رويت باندهاي ايجاد شده ..................................................................... 122
فصل سوم: نتايج
27- نتايج ..................................................................... 124
1-27- جداسازي 124
1-1-27- بررسي عملكرد محيط كشت.................................................................. 124
2-1-27- نتايج كشت نمونه هاي ارسالي ......................................................... 124
1-2-1-27- نتايج روز پنجم ............................................................ 125
2-2-1-27- نتايج روزهفتم تا دهم............................................................... 125
3-2-1-27- نتايج روزپانزدهم............................................ 126
2-27- نتايج PCR
1-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر جنس ........................................ 126
2-2-27- تائيد كلوني هاي جدا شده............................................ 127
3-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر كلاستر مايكوئيدس........................ 127
4-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر گونه آگالاكتيه..................................... 128
5-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر گونه مايكوئيدس كلوني بزرگ..................... 129
3-27- نتايج كالبد گشايي.......................................................................... 130
1-3-27- معيار انتخاب .................................................................................. 130
تميز كردن نماي ساختمان